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冷冻精液生产技术

浏览次数:正在读取 / 编辑:admin / 更新时间:2011-08-30
(一)采精 采精要有一定的采精环境,以便公畜建立起巩固的条件反射,同时防止精液圬染。釆精场应选择或建立在宽敞、平坦、安静、清洁的房子中,不论什么季节或天气均可照常进行工作,温度易控制。场内设有采精架以保定台牛或设立假台牛,供公牛爬跨进行采精。室内釆精场的面积一般为10米x10米,并附设喷洒消毒和紫外线照射杀菌设备。
  1.台牛的准备 釆精时用活台牛效果最好,伹应选择健康体壮、大小适中、性情温和、四肢有力的牛作为台牛。一般选择淘汰母牛或用阉割过的公牛作为台牛。采精前对台牛的尾根部、外阴部、阴门彻底清洗,再用干净的布抹干。用假台牛采精则更为方便且安全可靠。假台牛可用木材或金属材料制成,要求大小适宜,坚实牢固,表面柔软干净,用牛皮伪装。用假台牛采精,应先对公牛进行调教,使其建立条件反射。
  2.采精技术 一种理想的采精方法,应具备下列四个条件:①可以全部收集公畜一次射出的精液;②不影响精液品质;③公畜生殖器官和性机能不会受到损伤或影响;④器械用具简单,使用方便。公牛多采用假阴道法采精,有时也用按摩法。
  (1)假阴道法 它是利用模拟母牛阴道环境条件的人工阴道,诱导公畜射精而采集精液的方法。
  假阴道的结构:假阴道是一筒状结构,主要由外壳、内胎和集精杯三部分组成。外壳为一硬橡胶圆筒,上有注水孔;内胎为弹性强、薄而柔软无毒的橡胶筒,装在外壳内,构成假阴道内壁;集精杯由暗色玻璃或塑料制成,装在假阴道的一端。外壳和内胎之间可装温水和吹人空气,以保持适宜的温度(38—40℃)和压力。
  假阴道的准备:假阴道在使用前要进行洗涤、安装内胎、消毒、冲洗、注水、涂润滑剂、调节温度和压力等步骤。采集到符合要求的精液,假阴道应具备五个条件:①适当温度。通过注入相当于假阴道容积2/3的温水来维持温度,采精时假阴道内腔温度应保持在38—40℃。集精杯也应保持34—35℃温度,防止射精时因温度变化对精于产生危害。②适当压力。借助注入水和空气来调节假阴道的压力。压力不足不能刺激公畜射精,压力过大则使阴茎不易插入或插入后不能射精。③适应润滑度。用消毒过的润滑剂对假阴道内表面加以润滑,涂抹部位应是假阴道前段的1/3----1/2处至外口周围,涂抹段过长及润滑剂过多则会流人精液而影响精液晶质。④无菌。凡是接触精液的部分和内胎、集精杯均须消毒。⑤无破损漏洞。外壳、内胎、集精杯应检查,不得漏水或漏气。
釆精操作:利用假台牛采精时,最好是将假阴道安放到假台牛后躯内,种公牛爬跨假台牛而在阴道内射精,这是一种比较安全而简单的方法。但实践中常采用手持假阴道采精法。采精时将公牛引至台牛后面,采精员站在台牛后部右侧,右手握持备好的假阴道,当公牛爬跨台牛而阴茎未触及台牛时,迅速将阴茎导人假阴道(呈35度左右的角度)内即可射精。射精后,将假阴道的集精杯端向下倾斜,随公牛下落,让阴茎慢慢回缩自动脱出;阴茎脱出后,将假阴道直立、放气、放水,送化验室对精液进行检查合格后稀释。
  值得注意的是,公牛对假阴道的温度比压力更为灵敏,因此温度要更准确。而且公牛的阴茎非常敏感,在向假阴道内导人阴茎时,只能用掌心托着包皮,切勿用手直接抓握伸出的阴茎。同时,牛交配时间短促,只有数秒钟,当公牛向前一冲后即行射精。因此,釆精动作力求迅速敏捷准确,并防止阴茎突然弯折而损伤。
  (2)按摩法 操作时,先将直肠内的宿粪排除,术者手伸人直肠约25厘米处,轻轻按摩精囊腺,使精囊腺分泌物自包皮流出,然后将食指放在输精管两膨大部中间,中指和无名指放在一膨大部的外侧,拇指放在另一膨大部外侧对它按摩。按摩时,手指向前向后滑动并轻轻伴以压力,这样反复进行按摩,即可引起公牛精液流出,由助手将精液接人集精杯内。为减少细菌污染,助手最好配合按摩公牛阴茎s状弯曲部,使阴茎伸出包皮之外,收集精液。但这种精液质量要比假阴道法所采精液差,密度稀且易污染细菌。
  3.采精频率  釆精频率是指每周对公牛的采精次数。为了既能最大限度地采集公牛精液,又能维持其健康体况和正常生殖机能,必须合理安排采精频率。1头种公牛1周内采精次数在2—3次,或1周采1次,但连续采取2个射精量。因为连续射精2次时,第二次采得的精液,无论是量和质都较第一次好,可以将2次射出的精液混合在一起使用。随意增加采精次数,不仅会降低精液品质,而且会造成公牛生殖机能降低和体质衰弱等不良后果。
  (二)精液品质检查 精液晶质检查的目的是避免劣质精液冷冻和输精。精液检查的项目较多,有些常规项目必须每次检查,而有些项目可以定期抽查。
  1.感观检查 肉牛的射精量一般为每次4一8毫升,过多或过少都必须查明原因。若射精量太多,可能是由于副性腺分泌物过多或尿液混入;如过少,可能是由于采精技术不当、采精过频或生殖器官机能衰退所致。正常的精液颜色是乳白色,不透明黏稠,有时为乳黄色。若精液颜色异常,表明公牛生殖器官有疾病,应该弃去或停止采精。正常精液略有膻味。
  2.精于密度检查 精于密度指每毫升精液中所含有的精于数目。由此可计算出每次射精的总精于数,它直接关系到输精剂量的有效精于数。①估测法。通常与检查精于活率同时进行。一般压制标本,在显微镜下根据精于分布的稀稠程度,将精于密度粗略分为“密”、“中”、“稀”三级。此法在生产上常用,但在某种程度上有赖于检查者的经验而有一定的主观性。②血细胞计算法。是对公牛精液作定期检查的一个方法,可准确测定每单位容积精液中的精子数。一般采用血细胞计进行。由于牛的精液精于密度高,所以应使用细胞吸管作稀释后计算。
  3.精子活率检查 精于活率是指在精液中呈直线前进的精于数所占的百分率,与精于受精率密切相关。检查时,因牛精液密度较大,通常用生理盐水或等渗稀释液稀释后,取一滴精液于载玻片上制成压片标本,置38℃恒温显微镜载物台上在400倍下观察。对种公牛的精子活率采用十级评分法:视野中100%直线运动者评为1.O;90%者为O.9;80%者为O.8,以下类推。牛的精液(原精)活率一般在0.8—0.9,低于O.6不能用来制作冷冻精液。冷冻精液解冻后的活率不能低于O.3,低于0.3者不能应用。
  4.精于形态学检查 精液形态正常与否对受精率有密切关系。如果精液中含有大量畸形精于和顶体异常精于,则受精能力就会降低。
  (1)畸形率 指精液中畸形精子所占的比例。凡是形态不正常的精于均为畸形精于,如无头、无尾、双头、双尾、头大、头小、尾部弯曲,带原生殖滴等。这些畸形精子都无受精能力。检查方法是将精液1滴放于载玻片的一端,用另一边缘整齐的盖玻片呈30度一35度角把精液推成均匀的抹片。待干燥后,用0.5%龙胆紫酒精溶液染色2—3分钟,用水冲洗。干燥后,在600倍以上高倍显微镜下计数300—500个精于,计算畸形精子百分率。肉牛正常精液畸形率不得超过18%。
  (2)顶体异常率 正常精于的顶体内含有多种与受精有关的酶类,在受精过程中起着重要作用,顶体异常的精于失去受精能力。顶体异常一般表现有膨胀、缺损、部分脱落、全部脱落等情况。顶体异常发表的原因可能与精于生成过程和副性腺分泌物性状的不良有关,尤其是射出的精于遭受低温打击和冷冻伤害所致。因此,精于顶体异常率是评定保存精液,尤其是冷冻精液品质的重要指标之一。正常情况下,牛的顶体异常率不超过5.9%。
  (三)精液妁稀释
  1.精液稀释的目的 ①扩大精液量,以提高优良种公牛的利用串。一次采出的精液;如按原精液进行输精,1头母牛的输精量为1毫升,只能输4—6头母牛。实际上1毫升精液有3亿一20亿精于,而1头母牛输精需要的直线前进运动的精子只有1 500万一2 000万,所以浪费很多。将精液加以稀释后,就可以扩大输精头数。②延长精于存活时间。稀释液中含有营养物质和缓冲物质,可以补充营养及中和精于代谢产物,防止精于受低温打击。
  2.冷冻稀释液 冷冻稀释液的成分一般应含有低温保护剂(卵黄、牛奶)、防冻保护剂(甘油)、维持渗透压物质(糖类、柠檬酸钠)、抗生素及其他添加剂。根据配制要求和稀释的需要将冷冻稀释液配制成基础液、I液、Ⅱ液三种溶液,以便于在生产中使用。
  3.稀释 采出的精液在等温条件下立即用不含甘油的第1稀释液作第一次稀释,稀释比例应根据精液晶质作1—2倍稀释。然后,经40一60分钟缓慢降温至4—5℃,再加入等温的含甘油的第Ⅱ稀释液,加入量为第一次稀释后的精液量。
  (四)精液的平衡 将稀释好的精液放人2—5℃冰箱或冰瓶内静置2—4小时,使甘油充分渗透进入精于体内,产生抗冻保护作用。
  (五)冷冻 凡作冷冻保存的精液均需按头份进行分装。目前广泛应用的剂型有细管型和颗粒型。
  1.细管冷冻 以长125—133毫米、容量为0.25毫升的聚氯乙烯塑料细管,在2—5℃温度下,通过吸引装置将平衡后的精液进行分装,用聚乙烯醇粉末或超声波静电压封口。事先调整罐中冷冻支架和液氮面的距离(1—2厘米),使冷冻支架上的温度维持在-130——-135℃。将封好口的精液细管平铺在梳齿状的冷冻屉上,注意彼此不得相互接触,再放置于冷冻液氮罐中的冷冻支架上。以液氮蒸气迅速降温,约经10—15分钟,使细管精液遵循一定的降温程序。当温度降至-130度以下并维持一定的时间后,即可收集于精液提筒内,直接投入液氮中。
  2.颗粒冷冻 在装有液氮的容器上放置一薄铝板或金属网,如用聚四氟乙烯塑料板则精液冷冻效果更好。冷冻板和液氮面的距离在0.5—1.5厘米之间,使其温度维持在-80——-100℃。待冷冻板充分冷却后,用玻璃吸管吸取精液定量连续滴在冷冻板上,每个颗粒体积为O.1毫升。经过3—5分钟,精液充分冻结颜色变白、颗粒色泽发亮时,将精液颗粒收集于贮精瓶内,移入液氮内保存。
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